MRC-5人胚肺细胞系

MRC-5人胚肺细胞系

MRC-5人胚肺细胞系
细胞货号： C4220
细胞缩写： MRC-5细胞
细胞名称： MRC-5(人正常胚肺成纤维细胞)
T25培养瓶发货形式是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T25培养瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态（有条件可以拍下此时细胞照片）。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。将T25中培养基取出装好备用，如细胞密度80%，可以直接消化传代，相反则加入5-6ml培养基放回培养箱继续培养即可。背景资料： MRC-5细胞系来自14周龄男性胎儿的正常肺组织，该细胞老化前能传代42到46次群体倍增。 它是正常二倍体细胞系，46，XY核型。 模式染色体数为46，概率为70%。
细胞消化时注意把握消化时间，消化不够会导致吹打细胞时造成损伤，一般消化时间是2-3分钟，但以镜检时大部分细胞缩回球形为准，一般2次即可将细胞吹打下来，消化不够进行细胞吹打易损伤细胞。细胞系的冻存液配方：90%FBS+10%DMSO，贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外大学建系
公司提供的细胞代次低，活性好，质量有保障，全程为您的细胞相关科研实验研究保驾，技术一对一服务，细胞培养过程服务，代次： P4
规格： 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
细胞数： 1*10（6）
离心管发货形式是用15ml离心管发货的形式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。将T25中培养基取出装好备用(如果实验室没有T25培养瓶，可以暂时T75 培养瓶，加入10-15ml培养基,，建议10ml培养基，也可以使用T175 培养瓶，加入50-60ml培养基，培养瓶越大，需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话，一般不用大瓶子，先用小瓶子养起来再换大的，不然会长得很慢，严重的，会导致细胞死亡等危险)，平衡完成后，离心（1000rpm，3min）收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。生物安全级别： 1
生物体： 人
组织来源： 肺
细胞形态： 成纤维细胞样
"T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm，5min）后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（1000rpm，3min）收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。细胞特性：" 贴壁
特别注意：如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养，贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请选择直径6cm的培养皿进行传代培养，如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion），冻存液中含有DMSO请使用细胞级DMSO，同时浓度不要太高，部分细胞在10%DMSO条件下冻存会死亡，所以DMSO浓度5%-8%是比较推荐的浓度。细胞冻存及复苏遵循慢冻快融的原则，即取0.2-0.3ml的冻存液重悬的细胞于一个冻存管中，与正常体积冻存的细胞共同冻存，至液氮后复苏检查冻存结果。冻检合格前，留一部分细胞继续培养，以防万一。
细胞检测： 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件： 选择此细胞合适的培养基(DMEM低糖、DMEM高糖、RPMI-1640、McCoy's 5A等培养基)89%和10%PBS及1%双抗(防止污染)或者此细胞的完全培养基或者此细胞的培养基；生长条件：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃(模拟人体正常温度培养，这也是体外培养合适的温度)
上海黄浦传代比例建议1:2-1:3，长得比较快的细胞可以1:3，比较慢的按1:2传代。传代后，建议不要使用传代前培养所使用的培养基，会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险。细胞状态不好或者生长极慢的时候，可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。请不要随意更换培养基，因实验需要，可以逐步驯化(让它们慢慢适应)。传代方法： 建议1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件： 详见细胞说明书
冻存液配方：建议使用92%PBS+8%DMSO，客户自身实验室所使用的冻存液也可以适用，血清浓度不低于30%，DSMO含量不12%即可。细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5%CO2，湿度环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件；细胞于培养瓶或皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基（一般液面高度2-3mm即可）。主要文献： "请具体查阅相关发表文章，接收细胞相关问题：如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25及离心管发货的细胞将可以消毒后在37度过夜，血清发货的细胞在室温下静置1-2天（注意不要放冰箱），干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升华，请即刻复苏细胞。
T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm，5min）后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（1000rpm，3min）收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。"