A549复苏贴壁细胞株

A549复苏贴壁细胞株

A549复苏贴壁细胞株 "

公司已合作单位有广西医科大学、中山大学附属肿瘤医院、复旦大学、南方医科大学、浙江大学医学院附属邵逸夫医院、深圳市孙逸仙心血管医院、福建省立医院、上海宠乐道宠物医院、中国科学院上海高等研究院、北京市昌平区中西医结合医院、中国医学科学院肿瘤医院、云南中医学院、绍兴市人民医院、汕头大学医学院、首都医科大学附属北京同仁医院、解放军总医院、上海瑞金医院、北京宣武医院、吉林大学临床医院、北京中医药大学附属东直门医院、北京天坛医院、复旦大学附属肿瘤医院、河北医科大学第二医院、北京军区总医院、上海市中医医院、浙江省中医院、上海华山医院、哈尔滨医科大学附属医院、西安唐都医院、上海长征医院、广州珠江医院、上海仁济医院、山西省眼科医院、航天中心医院、中山大学肿瘤医院、重庆新桥医院、浙江大学附属第二医院、解放军总医院(301医院)、北京大学第三医院、广州军区广州总院、北京大学人民医院、山西医科大学第二医院、、广州中医药大学附属医院、宁波市第二医院、广州南方医院、西京医院、复旦大学附属中山医院、浙江大学医学院附属医院、重庆医科大学第二医院、北京地坛医院、北京大学医院、中山大学附属医院、天津市肿瘤医院、第二军医大学东方肝胆外科医院、北京肿瘤医院、湖南省肿瘤医院、南方医院、广东省人民医院、北京市广安门医院、北京同仁医院、复旦大学附属眼耳鼻喉科医院、上海仁济医院(西部)、山东大学齐鲁医院、海军总医院" "

细胞培养实验常见问题总结：
1.一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制。
2.快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？
我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞。
3.可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4.可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5.培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生的影响。血清的含量一般为5%-15%，不要低于5%或高过20%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过高则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为10%，可以适量加减。
6. 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换。
7.购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集。
8.购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。
9. 购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C太久。
10. 收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。" "

细胞培养中常见的污染情况总结
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理
2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用相关试剂擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把相关试剂放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待相关试剂的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作。
3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。
4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。
5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。
6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，终形成恶性循环。污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标定要撤去双抗，以避免影响实验结果。
1、孵箱应定期用三氧机消毒或者紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水
2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素
3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染
4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。" "

细胞培养三不要：
养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：
1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）
其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更，超净台内根本就不点酒精灯。
2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，特别是对原代细胞或是磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。
3. 不要怕消化。在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。" "

公司提供部分ATCC细胞有(限于页面篇幅，公司全部细胞并未展示，如有具体所需细胞，请咨询我们哦┈技┈术(订购)┈热┈线：0┈2┈1┈5┈4┈3┈8┈5┈3┈1┈3(1┈5┈8┈0┈0┈5┈7┈6┈8┈6┈7┈微┈信┈同┈号)┈联┈系┈Q┈Q：3┈3┈0┈6┈0┈8┈4┈3┈5┈0)；CRL-12103|FDC-P1细胞；HB-12317|NG108-15细胞；TIB-68|WEHI-3细胞；CCL-89|AtT-20细胞；CRL-1732|Fox-NY细胞；CRL-10609|MMQ细胞；CRL-1443|BC3H1细胞；CRL-1592|IEC-6细胞；CL-101|LLC-PK1细胞；CCL-96|3T6-Swiss albino细胞；CRL-1458|L6细胞；CRL-1378|RBL-1细胞；CCL-167|MPC-11细胞；CRL-1714|TM3细胞；CRL-1715|TM4细胞；CRL-2132|DSL-6A/C1细胞；CCL-92|3T3-swiss albino细胞；CRL-11605|RIN-m5F细胞；CCL-93|V79-4细胞；CCL-163.2|BALB/3T3细胞；CRL-1476|A10细胞；CRL-2111|DT40细胞；CRL-1447|G-7细胞；CRL-2174|Sol8细胞；CCL-198|BLO-11细胞；CCL-197|NOR-10细胞；CRL-1777|HIT-T15细胞；CRL-11506|Beta-TC-6细胞；CCL-26|BS-C-1细胞；CRL-1548|H-4-II-E细胞；TIB-214|CTLL-2细胞；CRL-1658|NIH/3T3细胞；HB-8064|Hep 3B(Hep 3B2.1-7)细胞；TIB-152|Jurkat, Clone E6-1细胞；HTB-15|U-118 MG细胞；CCL-70|CV-1[Part of the Wistar Special Collection]细胞；HTB-81|DU 145细胞；HTB-176|H9细胞；CCL-1|L929细胞；CRL-1586|VERO C1008细胞；CRL-1550|Ca Ski细胞；CCL-222|COLO 205细胞；CL-173|3T3-L1细胞；CCL-240|HL-60细胞；" "

C1210 SNU216细胞株
C4142 SNU-182细胞株
C1208 SNU-16细胞株
C7201 SNU-1040细胞株
C1902 SNU-1细胞株
C1207 SNK6 NK/T细胞株
C1901 SNG-M细胞株
C1900 SN12C细胞株
C7059 SMMC-7721细胞株
C1206 SMMC7721细胞株
C1205 SMC-1细胞株
C1204 SMC细胞株
C1203 SLMT-1细胞株
C1202 SL-7细胞株
C1201 SL-1细胞株
C1899 SK-UT-1细胞株
C1200 SK-RC-42细胞株
C1898 SKOV-3-DDP细胞株
C4422 SK-OV-3细胞株
C6001 SKOV-3细胞株
C4704 SK-N-SH细胞株
C4703 SK-N-MC细胞株
C1897 SK-N-FI细胞株
C1196 SK-NEP-1细胞株
C1896 SK-N-DZ细胞株
C6038 SK-N-BE(2)细胞株
C1194 SK-N-AS细胞株
C4217 SK-MES-1细胞株
C1192 SK-MEl-5细胞株
C1191 SK-MEL-31细胞株
C1894 SK-MEL-3细胞株
C1190 SK-MEL-28细胞株
C1893 SK-MEL-24细胞株
C1892 SK-MEL-2细胞株
C4716 SK-MEL-1细胞株
C1188 SKM-1细胞株
C4224 SK-LU-1细胞株
C1891 SK-LMS-1细胞株
C1186 Ski细胞株
C4138 SK-HEP-1细胞株
C1184 SK-HEL-1细胞株
C7133 SK-GT-4细胞株
C1183 SKG-IIIa细胞株" "

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