bEnd.3复苏贴壁细胞株

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解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：
在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！
出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：
1.解冻过程中细胞裂解
推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升。
2.解冻过程中的问题
推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养。
3.对冷冻液过敏
推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的佳条件在对数期。
4.被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄
推荐的解决方案：解冻近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
出现大量细胞碎片的可能原因及推荐解决方案如下：
1.冷冻时细胞密度过低：推荐的解决方案：缩短解冻过程中的时间。将细胞取出后，立即将冻存管浸入在37℃的水浴中，并震荡至全部融化，然后迅速地转移到预热的培养基中。
2.不适当的冷冻过程：推荐的解决方案：解冻不同冷冻室总的试管。确保在冻存过程中采用的适当的技术，并确保使用了适量和适合的冷冻液。
出现生长缓慢的可能原因及推荐解决方案如下：
1.培养瓶的大小：一般解决方案是一些细胞在培养基中倾向于维持一定的密度。将培养物转移到较小的培养瓶中，使细胞密度上升；如，根据培养基的体积，从T75培养瓶转移到2或3个T25培养瓶中。
2.细胞密度过低：通常解决方案是提高未来冷冻物种细胞的冻存密度，或使用较小的培养容器，或解冻多个试管来进行培养。" "

实验细胞培养基常见问题总结：
培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。别小看细胞培养，这里可蕴含着大大的学问。有时候细胞状态不好，接下来的一系列实验根本就没法做。影响细胞培养的因素很多，那就先从培养基开始说起。
培养基常见问题：
1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外大学细胞库收集了绝大多数细胞的详细资料。细胞数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关文献等资料。
2.液体培养基可以放-20℃保存吗？不可以！因为在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致培养基渗透压降低，培养细胞时，细胞容易破裂而死亡。
3.自己新配制的液体培养基能保存多久？我们建议将新配制的培养基放置于4℃，避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。
4.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
5.培养基中是否须添加抗生素？除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。为防止细菌、真菌污染，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml，链霉素为100ug/ml。
6.为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值越来越偏碱性？培养基保存于4℃冰箱中， 培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO2，以调整pH值。
7.培养液pH是怎样影响细胞生长的？由于大多数细胞适宜PH值为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对PH值要求也不完全相同，原代细胞培养一般对PH值变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更有利于细胞的生长。因此，配制培养用液时可把液体的PH值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时，PH值会向上浮动0.2左右。
8.培养液渗透压是怎样影响细胞生长的？当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情况下，水分通过渗透流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩，这种情况会使DNA和蛋白遭到破坏，细胞周期停滞以及终使细胞死亡；反之，低渗透压使水分流入细胞内，使细胞肿胀破裂。
9.为什么液体培养基1640有时候颜色发黄，是pH值不对吗？不是。因为配方原因，1640为碱酚红型，其中酚红的浓度只有DMEM的四分之一，所以是因为酚红浓度低，而非PH值低。
10.为什么有客户要求培养基中不含酚红？研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。" "

常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、 细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
3、对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来细胞的状态和生长速度。
4、对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时（即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白），此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。
复苏细胞注意事项：
1收到细胞后当天换液，全部更换成客户自己的新鲜培养基，放进培养箱，第二天再消化。
2边观察边消化，根据细胞的形态，终止消化时间，采取以半分钟间隔吹打细胞边缘，如可吹打下来，即终止消化。客户摸索比较好的消化时间。
3随细胞有一份细胞操作说明书，请客户仔细查看。
4记得加1%双抗，降低被污染的概率。另外尽早冻存留种，以备后用。
5售后时间为一周，于细胞本身的质量问题，而因乙方自己不当操作（不规范操作，消化过度，不加双抗导致的污染等）导致的细胞问题不在售后范畴。
6收到细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请您务必重视。
7刚收到细胞时，胎牛血清可以用15%培养两三天，利于细胞尽快恢复状态，细胞状态稳定后，再调回10%即可。
（其中1,2条针对于贴壁细胞，悬浮细胞详情请见细胞操作说明书）" "

公司提供部分ATCC细胞有(限于页面篇幅，公司全部细胞并未展示，如有具体所需细胞，请咨询我们哦┈技┈术(订购)┈热┈线：0┈2┈1┈5┈4┈3┈8┈5┈3┈1┈3(1┈5┈8┈0┈0┈5┈7┈6┈8┈6┈7┈微┈信┈同┈号)┈联┈系┈Q┈Q：3┈3┈0┈6┈0┈8┈4┈3┈5┈0)；CCL-2|HeLa细胞；HTB-35|SiHa细胞；CRL-1550|CaSKi细胞；CRL-1671|RL95-2细胞；HTB-31|C-33A细胞；CRL-2505|22RV1细胞；HTB-144|JAR细胞；HTB-36|JEG-3细胞；CCL-98|BeWo细胞；CRL-11609|RWPE1细胞；CRL-1635|HS68细胞；HTB-133|T-47D细胞；CRL-2327|HCC1428细胞；HTB-125|Hs 578Bst细胞；HTB-24|MDA-MB-157细胞；CRL-1735|Lec1细胞；CRL-11731|TOV-112D细胞；HTB-32|HT-3细胞；CCL-243|K562细胞；CCL-213|Daudi细胞；CCL-246|KG-1细胞；TIB-161|HuT 78细胞；CRL-2570|A3细胞；TIB-202|THP-1细胞；CRL-9792|Dami细胞；CRL-2021|MEG-01细胞；CRL-2099|KU812细胞；CRL-2724|Kasumi-1细胞；CRL-2003|TF-1细胞；HB-82|BB7.2细胞；CRL-11386|TALL-104细胞；TIB-162|Hut-102细胞；CCL-86|Raji细胞；CRL-1648|CA46细胞；CRL-1596|RAMOS(RA.1)细胞；CRL-1432|NAMALWA细胞；CRL-1593.2|U937细胞；CRL-1582|MOLT-4细胞；CRL-1993|HMy2.CIR细胞；CCL-119|CCRF-CEM细胞；CRL-8001|OKT3细胞；CCL-137|HEL299细胞；CRL-2407|NK-92细胞；CRL-2408|NK-92MI细胞；HTB-104|Cates-1B细胞；" "

C1789 NCI-H510细胞株
C1788 NCI-H508细胞株
C4204 NCI-H460细胞株
C4200 NCI-H446细胞株
C1787 NCI-H441细胞株
C0960 NCI-H358细胞株
C4201 NCI-H345细胞株
C7034 NCI-H3255细胞株
C1786 NCI-H322细胞株
C7033 NCI-H3122细胞株
C0958 NCI-H295R细胞株
C1785 NCI-H295细胞株
C4211 NCI-H292细胞株
C1783 NCI-H28细胞株
C0956 NCI-H2452细胞株
C1782 NCI-H2444细胞株
C1781 NCI-H2405细胞株
C1780 NCI-H2347细胞株
C1779 NCI-H2342细胞株
C4213 NCI-H23细胞株
C1778 NCI-H2291细胞株
C1777 NCI-H2286细胞株
C4232 NCI-H226[H226]细胞株
C0954 NCI-H226细胞株
C1776 NCI-H2228细胞株
C4210 NCI-H2227细胞株
C1775 NCI-H2196细胞株
C1774 NCI-H2172细胞株
C1773 NCI-H2171细胞株
C4228 NCI-H2170[H2170]细胞株
C0952 NCI-H2170细胞株
C1772 NCI-H217细胞株
C1771 NCI-H2141细胞株
C7032 NCI-H2135细胞株
C1770 NCI-H2126细胞株
C1769 NCI-H2122细胞株
C1768 NCI-H2110细胞株
C1767 NCI-H211细胞株
C1766 NCI-H2107细胞株
C1765 NCI-H2106细胞株
C4235 NCI-H209细胞株
C4214 NCI-H2087细胞株
C1764 NCI-H2085细胞株" "

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