产品介绍:
产品名称:巴西果仁源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
产品货号:LZ-P4222
规格:50T
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光。
有效期:一年
如何进行 PCR 实验?
一、准备实验材料(1)DNA模板:包含你想要复制的DNA区域。上海(2)引物:短的单链DNA片段,用于指导DNA合成的起始位置。(3)DNA聚合酶:一种酶,用于合成DNA。(4)四种脱氧核苷酸(dNTPs):DNA的构建块。(5)缓冲液:提供适宜的反应环境。(6)镁离子或其它必需的离子:通常作为DNA聚合酶的辅助因子。二、设定反应混合物将所有材料混合在微量离心管中。混合物的总体积通常在20-50微升之间。
3. PCR程序(1)将混合物放入PCR机(热循环仪)中,并设定程序。PCR程序通常包括以下阶段:(2)初次变性:加热至94-98°C,持续几分钟,使DNA双链解开成单链。(3)循环步骤(通常进行30-40次循环):(4)变性阶段:加热至94-98°C,持续20-30秒,使DNA双链解开。(5)退火阶段:降温至50-65°C,持续20-40秒,允许引物与模板DNA结合。(6)延伸阶段:加热至72°C,持续1分钟每1千个碱基,以便DNA聚合酶合成新的DNA链。(7)后延伸:在72°C下持续5-10分钟,确保所有可用的DNA模板都被复制。(8)保持阶段:将温度降至4-15°C,直到用户准备取出样品。
实验步骤:
一.样品制备
1.PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测,上样量3-5ul。PCR产物为10ng/nl左右为佳。
2.PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ul SSCP上样缓冲液(变性缓冲液,同《分子克隆》中的测序缓冲液),然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验,扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就适当增加1.5、2或3不等,同时加大上样缓冲液的量,比如加3ul的PCR产物,缓冲液加到8ul变性效果更好。
3.PCR产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR仪上95℃变性10分钟,立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min,以免变性的产物复性。
PCR实验的基本步骤:
DNA聚合酶是实验室中常用的生物学酶之一,在PCR实验中具有重要的作用。实验室常用的DNA聚合酶,包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。
一巴西果仁源性成分PCRTaq聚合酶:
Taq聚合酶是由Thermus aquaticus细菌产生的一种DNA聚合酶,在分子生物学研究中得到广泛应用。Taq聚合酶具有热稳定性,可以在高温条件下保持活性,这是由于其来源于热液生物,能够存活和正常活动于高温环境。这使得Taq聚合酶在聚合酶链式反应(PCR)中起到关键的作用。Taq聚合酶能够按照DNA模板合成新的DNA链,因此在PCR中用于扩增目标DNA片段。然而,Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性,导致其生成的PCR产物末端容易出现额外的腺嘌呤碱基。因此,在某些应用中,需要使用具有外切酶活性的聚合酶。
二、Pfu聚合酶:
Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶相比,Pfu聚合酶具有更高的热稳定性和耐酶性。这使得Pfu聚合酶在高温PCR反应中表现出色,其高度稳定的酶活性能够确保PCR反应的可靠性和准确性。此外,Pfu聚合酶还具有3'-5'外切酶活性,可以修复并纠正PCR反应中的腺嘌呤碱基误配,有效防止误差累积。因此,Pfu聚合酶适用于需要高度准确的PCR扩增和DNA测序。
三、巴西果仁源性成分试剂Tth聚合酶:
Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同,Tth聚合酶具有热活性反转转录酶活性,可以将RNA模板合成相应的DNA链。因此,Tth聚合酶在逆转录PCR(RT-PCR)中得到广泛应用,用于将RNA转录成DNA,并通过增加热活性酶来实现PCR扩增。此外,Tth聚合酶还具有一定的外切酶活性,可用于修复和校正PCR产物的末端。
(左)氧扶沙星杂质E (left)ofloxacinimpurity E 50mg
芝麻林速Sqscmolin1926/7/8HPLC≥98%,20mg/vial
异莲心减 Isoliensinine 6817-41-0 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
标准品人胎盘泌乳素150536-9903(原批号:536-9903)测定用
胡椒碱;胡椒酰胺 Piperine 94-62-2 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
瓜馥木Fissistigma oldhamii Neorauflavene 4-(5-甲氧基-8,8-二甲基-2H,8H-本并[1,2-B:5,4-B']二-3-基)-1,3-本二酚 53734-75-1 C21H20O5 ≥95%
梓酚Ziphqnol34168-26-420mg
本品为菊科植物苍耳Xanthium sibiricum Pa 的干燥成熟带总苞的果实 3,4,5-icaffeoylinoneic acid 3,4,5-三咖非酰奎宁酸 86632-03-3 C34H30O15 单元素锑溶液成分分析标准物质080588
含量测定扶康唑100314-200503常温,避光100mg
pxenothi吩噻嗪标准品92-84-2 500mg
喜马拉雅紫茉莉 Himalaya purplejasmine 0.5g
紫云英甙Asagalin480-10-4HPLC≥98%,20mg/vial
PinoceMbrin 松属素 480-39-7
猪去氧胆酸83-49-8Hyodeoxycholic acid
异橙黄酮;3’,4’ ,5,7,8-五甲氧基黄酮 3’,4’ ,5,7,8-pentametxoxyflavone 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
巴西果仁源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra/CD121)ELISA试剂盒 ,英文名: IL1Ra/CD121 ELISA Kit
大鼠红细胞生成素(EPO)ELISA检测试剂盒RatErythropoietin,EPOELISAKit 96T/48T
人TAR DNA结合蛋白43(TARDBP/TDP43)试剂盒 Human TARDBP ELISA Kit
英文名称MouseHeatShockProtein40ELISAKit小鼠热休克蛋白40(HSP40)规格:96T/48T
pE融合蛋白扩增试剂盒10次ಉ㒠ಉ