TPS组织多肽特异性抗原ELISA试剂盒

TPS组织多肽特异性抗原ELISA试剂盒

我司位于上海奉贤区我司提供的试剂仅供研究使用       

实验目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中TPS组织多肽特异性抗原的含量。

实验原理：

   试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被TPS组织多肽特异性抗原捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的TPS组织多肽特异性抗原呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒组成：

操作步骤：

TPS 试剂盒方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M0.05ml。

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　组织多肽特异性ELISA方法二　用于检测未知抗体的间接法：　　　

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

注意事项：

1.　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

2.　在酶联ELISA试剂盒中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

(1)　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

　　（2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。

(3)　TPS ELISA Kit酶标记抗体工作浓度的选择：用直接ELISA检测试剂盒法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4)　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

公司正在出售的产品：

SFTPD重组小鼠 SFTPD / SP-D / SFTP4 蛋白 (His 标签) Protein

CD56/NCAM1(Neural Cell Adhesion Molecule 1 0.5mgCD56/NCAM1(Neural Cell Adhesion Molecule 1) 神经细胞粘附分子1抗原

IFNA10重组人 Interferon alpha 10 / IFNA10 蛋白 (Fc 标签) Protein

TERF1 Protein Human 重组人 TERF1 / TRF1 蛋白 (His 标签)

ANPEP Protein Mouse 重组小鼠 ANPEP / APN / CD13 蛋白 (His 标签)

KDR重组小鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (Fc 标签) Protein

单核细胞趋化蛋白4(MCP4)重组蛋白 Recombinant Monocyte Chemotactic Protein 4 (MCP4)

CD300LG重组人 CLM-9 / TREM4 / CD300LG 蛋白 (His 标签) Protein

SRPK1 Protein Human 重组人 SRPK1 蛋白 (His & GST 标签)

CD22 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD22 蛋白 (Fc 标签)

IL18RAP重组食蟹猴 IL18RAP 蛋白 (Fc 标签) Protein

MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor 0.5mgMIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) 巨噬细胞移动抑制因子抗原

VSIG4重组人 VSIG4 蛋白 (His 标签) Protein

TCN2 Protein Human 重组人 TCN2 / Transcobalamin-II 蛋白 (His 标签)

IGSF8 Protein Mouse 重组小鼠 PGRL / IGSF8 蛋白 (His 标签)

CNTN3重组人 Contactin 3 / CNTN3 蛋白 (708 Asp/Asn, Fc 标签) Protein

卵巢蛋白1(OTUB1)重组蛋白 Recombinant Otubain 1 (OTUB1)

CECR1重组人 CECR1 / ADA2 蛋白 (His 标签) Protein

STK10 Protein Human 重组人 STK10 / LOK 蛋白 (His 标签)

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

TPS组织多肽特异性抗原ELISA试剂盒ECE2重组人 ECE-2 蛋白 (Fc 标签) Protein

趋化因子C-X-C-基元受体6(CXCR6)重组蛋白 Recombinant Chemokine C-X-C-Motif Receptor 6 (CXCR6)

APCDD1重组人 APCDD1 蛋白 (Fc 标签) Protein

SPINK4 Protein Human 重组人 SPINK4 蛋白 (His 标签)

NA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (H274Y mutation) (高活性)