关键词 |
荧光定量PCR试剂盒,雷氏普罗威登斯菌PCR,雷氏普罗威登斯菌试剂 |
面向地区 |
产品介绍:
产品名称:雷氏普罗威登斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称:Providencia rettgeri
产品货号:LZ-P3955
规格:50T
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光。
有效期:一年
如何进行 PCR 实验?
一、准备实验材料(1)DNA模板:包含你想要复制的DNA区域。上海(2)引物:短的单链DNA片段,用于指导DNA合成的起始位置。(3)DNA聚合酶:一种酶,用于合成DNA。(4)四种脱氧核苷酸(dNTPs):DNA的构建块。(5)缓冲液:提供适宜的反应环境。(6)镁离子或其它必需的离子:通常作为DNA聚合酶的辅助因子。二、设定反应混合物将所有材料混合在微量离心管中。混合物的总体积通常在20-50微升之间。
3. PCR程序(1)将混合物放入PCR机(热循环仪)中,并设定程序。PCR程序通常包括以下阶段:(2)初次变性:加热至94-98°C,持续几分钟,使DNA双链解开成单链。(3)循环步骤(通常进行30-40次循环):(4)变性阶段:加热至94-98°C,持续20-30秒,使DNA双链解开。(5)退火阶段:降温至50-65°C,持续20-40秒,允许引物与模板DNA结合。(6)延伸阶段:加热至72°C,持续1分钟每1千个碱基,以便DNA聚合酶合成新的DNA链。(7)后延伸:在72°C下持续5-10分钟,确保所有可用的DNA模板都被复制。(8)保持阶段:将温度降至4-15°C,直到用户准备取出样品。
实验步骤:
一.样品制备
1.PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测,上样量3-5ul。PCR产物为10ng/nl左右为佳。
2.PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ul SSCP上样缓冲液(变性缓冲液,同《分子克隆》中的测序缓冲液),然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验,扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就适当增加1.5、2或3不等,同时加大上样缓冲液的量,比如加3ul的PCR产物,缓冲液加到8ul变性效果更好。
3.PCR产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR仪上95℃变性10分钟,立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min,以免变性的产物复性。
PCR实验的基本步骤:
DNA聚合酶是实验室中常用的生物学酶之一,在PCR实验中具有重要的作用。实验室常用的DNA聚合酶,包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。
一、雷氏普罗威登斯菌PCRTaq聚合酶:
Taq聚合酶是由Thermus aquaticus细菌产生的一种DNA聚合酶,在分子生物学研究中得到广泛应用。Taq聚合酶具有热稳定性,可以在高温条件下保持活性,这是由于其来源于热液生物,能够存活和正常活动于高温环境。这使得Taq聚合酶在聚合酶链式反应(PCR)中起到关键的作用。Taq聚合酶能够按照DNA模板合成新的DNA链,因此在PCR中用于扩增目标DNA片段。然而,Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性,导致其生成的PCR产物末端容易出现额外的腺嘌呤碱基。因此,在某些应用中,需要使用具有外切酶活性的聚合酶。
二、雷氏普罗威登斯菌试剂Pfu聚合酶:
Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶相比,Pfu聚合酶具有更高的热稳定性和耐酶性。这使得Pfu聚合酶在高温PCR反应中表现出色,其高度稳定的酶活性能够确保PCR反应的可靠性和准确性。此外,Pfu聚合酶还具有3'-5'外切酶活性,可以修复并纠正PCR反应中的腺嘌呤碱基误配,有效防止误差累积。因此,Pfu聚合酶适用于需要高度准确的PCR扩增和DNA测序。
三、Tth聚合酶:
Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同,Tth聚合酶具有热活性反转转录酶活性,可以将RNA模板合成相应的DNA链。因此,Tth聚合酶在逆转录PCR(RT-PCR)中得到广泛应用,用于将RNA转录成DNA,并通过增加热活性酶来实现PCR扩增。此外,Tth聚合酶还具有一定的外切酶活性,可用于修复和校正PCR产物的末端。
血影细胞膜荧光染色试剂盒
纤维素分解活力(FIBRINOLYTIC)检测试剂盒
CASPASE-2蛋白表达ELISA定量检测试剂盒
细胞线粒体复合物V蛋白表达比色法定量检测试剂盒
冰冻切片半胱13(CASPASE-13)活性原位荧光染色检测试剂盒
石蜡切片糖原高碘酸希尔(PAS)法染色试剂盒
真菌/酵母胱硫醚-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性比色法定量检测试剂盒
细胞SPHK激酶总活性比色法定量检测试剂盒(510)
组蛋白脱乙酰化酶5(HDAC5)活性比色法定量检测试剂盒
肠毒素B(Staphylococcus aureus : enterotoxin B)鉴定16S rDNA PCR扩增检测试剂盒
大鼠肾上腺髓质素基因引物对
血液维生素A含量比色法定量检测试剂盒
β淀粉样前体蛋白结合蛋白2抗体(X11β)
乳腺癌易感基因环状结构域蛋白抗体
20号染色体开放阅读框151抗体
ATP依赖的解旋酶CHD3抗体
细胞周期蛋白N端结构域蛋白1抗体
干扰素调节因子4结合蛋白抗体
内皮细胞粘附分子抗体
FIGNL1蛋白抗体
谷胱甘肽过氧化酶4抗体
微丝相关蛋白hHBrk1抗体
雷氏普罗威登斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒白介素2抗体