新孢子虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒

产品名称：新孢子虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Neospora spp.

产品货号：LZ-P3849

分类：PCR检测试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光，快递免费送货上门。

PCR检测试剂盒有效期一般为1年，这是指在适当的储存温度下。新孢子虫通用PCR核酸扩增部分的试剂一般要贮存于-20℃下，产物检测部分试剂则贮存于2-8℃。尽量避免反复冻融。上海

【结果分析条件设定】

u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。

u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的高点。

【质控标准】

1.  阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；

2.   阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；

3.   以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。

【结果判断】

1.阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；

2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；

3.   阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。

PCR反应的特异性决定因素为：

　　　①引物与模板DNA特异正确的结合；

　　　②碱基配对原则；

　　　③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

　　　④靶基因的特异性与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

(2) 新孢子虫通用试剂灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中小检出率为3个细菌。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

(4)对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

公司正在出售的产品：

人水通道蛋白1(AQP-1)ELISA

小鼠组胺(HIS)试剂盒 Mouse Histamine,HIS ELISA Kit

猪圆环病毒通用型(PCV-Ⅰ)试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

Humanphosphoglyceratemase2,PGAM2PCR检测试剂盒人0酸甘油酸变位酶2(PGAM2)PCR检测试剂盒

ELISAKitLIFR猪白血病抑制因子受体规格：48T/96T

HumanDehydroepiandrosterone,DHEAELISAKit人脱氢表雄同(DHEA)PCR检测试剂盒

人α-突触核蛋白(a-Synuclein)PCR检测试剂盒 组装/原装

兔子补体蛋白5(C5)试剂盒 Rabbit Compleme 5,C5 ELISA Kit

溶血血小板活化因子(lyso-PAF)PCR检测试剂盒 ， lyso-PAF ELISA Kit

PorcineSuperOxidaseDimase,SODPCR检测试剂盒猪超氧化物歧化酶(SOD)PCR检测试剂盒

HumanankyrinB,Ank-BPCR检测试剂盒人锚蛋白B(Ank-B)PCR检测试剂盒

Humanbasicfetoprotein，BFPELISAKit人碱性胎儿蛋白(BFP)PCR检测试剂盒

新孢子虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒SEN1： 细胞衰老相关蛋白1抗体 0.2ml

EIF4B： 真核翻译起始因子4B抗体 0.1ml

阴离子转运蛋白-1 Anti-OAT-1 human 0.1ml

Anti-phospho-Smad2(p-Ser465) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠、，马，犬，鸡0酸化Smad2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-NR1D1(Ser55/59) 0酸化细胞核受体Rev-Erbα抗体 规格 0.1ml

DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase)N terminal 双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗原(N端)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

PCR检测步骤:

1、样品处理

1）按照GB 4789.10-2016（或SN/T 1870-2016），取样品25g（mL），加入到含有225mL 7.5% NaCl肉汤的无菌容器中均质，调节pH至6.8±0.2。

2）36±1℃培养18-24h。

注：也可参考其他地方标准进行样品的前处理。

2、核酸提取

1）取40μL增菌液于裂解液管中，98℃或沸水浴10min。

2）冷却至室温，吸取上清备用或者置于-20℃保存。

3、反应体系配置

从试剂盒中取出SA预混液，充分融化，短暂离心，然后将阴性对照、样品的DNA提取液、阳性对照各取5μL分别加入PCR管中，盖好管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。

4、PCR扩增

PCR管置于PCR仪上，推荐反应程序设定如下：反应体系为25μL，在第二步每个循环60℃时检测荧光信号，检测通道选择FAM。